基本介紹

病理學從研究對象區分，可以分為人體病理學和實驗病理學，作為科研工作者，實驗病理學是我們研究的主要方向。

實驗病理學以實驗動物模型、體外培養細胞、組織和器官為研究對象。動態的研究人體疾病的發生發展規律。

實驗病理學的整體技術小編歸納為兩大類，一是制片技術、另一是染色技術。

下面將從這兩個方向為大家做整體介紹。

01制片技術

· 制片方法   

病理制片方法種類較多，如火棉膠切片、碳蠟切皮、石蠟切片、超薄切片、冷凍切片等等。

不同實驗特點選擇不同的制片技術。

廣泛的制片技術為組織石蠟切片和組織冷凍切片。

· 組織石蠟切片   

在制備石蠟切片前，需要良好的樣本處理方式。

大多采用甲醛固定的方法，大家可以選擇10%中性福爾馬林固定液或者使用4%多聚甲醛固定液。

固定時間小編建議24-48h，盡量避免長時間的固定，可能造成抗原的丟失。

· 組織冷凍切片   

冷凍切片常用于特殊的染色技術，如油紅O染色、酶化學染色（線粒體、呼吸相關等等）及熒光類染色。

制備冷凍切片的樣本同樣需要良好的前處理，一般可以選擇與石蠟切片相同的樣本處理方式，另外可以直接將樣本液氮速凍，置于-80℃保存。

同樣不建議長期保存，減少抗原的丟失。

02染色技術

· 分類   

制備好的切片可以用于后續病理染色，通過染色更直觀的觀測到組織細胞形態結構、多肽、酶及蛋白質含量的變化，達到準確定位、定性和定量的研究目的。

隨著新技術新手段的出現，染色方法也不斷發展，但總結歸納起來，常見的病理染色技術可以分為五大類：常規染色、特殊染色、組織化學染色、免疫組織化學染色及原位雜交技術。

· 常規染色   

常規染色是基礎的病理染色方法，即蘇木素-伊紅染色（HE染色），通過兩種染料對細胞結構的細胞核及細胞質染色呈現的不同顏色，進而呈現整體組織的形態結構，通過與正常組織結構形態的對比，分析組織疾病等的病理改變。

· 特殊染色   

特殊染色是對組織細胞中的特定結構、成分進行區分。特殊染色種類繁多，比如masson染色、Nissl染色。油紅O染色、天狼猩紅染色、PAS染色、Giemsa染色等等。通過不同染色方法呈現不同的結構特征，如顯示纖維組成、神經元尼氏體、脂質的堆積、糖原的沉積、炎性細胞的種類等等。使得特殊染色成為病理染色及病理鑒定當中十分重要的一種手段。由于特殊染色的種類之多，染料顏色之豐富，下面隨小編一起來欣賞欣賞這些多彩的特染世界。

· 組織化學染色   

組織化學染色是基于酶化學反應的染色技術，對于大多數酶如線粒體酶、細胞色素氧化酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶等等均可以采用組織化學的染色方法進行染色。該類染色為保證組織內酶活性，通常都是使用冷凍切片進行染色。

· 免疫組織化學染色   

免疫組織化學染色是常用的用標記的抗體（或抗原）對細胞或組織內的相應抗原（或抗體）進行定性、定位或定量檢測方法；通過顯色反應之后，用顯微鏡、熒光顯微鏡觀察的染色方法。

根據顯色體系的不同可將免疫組織化學染色分為化學顯色法IHC及免疫熒光染色。由于熒光標記物在不同波段下顯示的不同熒光，又發展出免疫熒光單染、免疫熒光雙染及多重免疫熒光染色，使得在同一組織下能夠同時顯現多個抗原或蛋白的表達情況。

· 原位雜交   

原位雜交（In Situ Hybridization）也稱為原位雜交組織化學，是指以特定標記的已知核酸序列為探針，原位檢測細胞涂片或組織切片中核酸（DNA/RNA）的技術。常用的標記物有放射性標記物、生物素、地高辛、熒光標記物，酶類等。通過顯微鏡或熒光顯微鏡進行定位觀察。