細胞實驗檢測
血管形成實驗
一、實驗概念
血管形成體外模型可分為細胞水平的增殖實驗、遷移實驗和管腔形成實驗，以及器官水平的人胎盤血管段培養模型和大鼠動脈環模型。目前通常所說的血管形成實驗是指管腔形成實驗。管腔形成反映毛細血管的早期過程，是體外檢查內皮細胞功能最完整的指標。
血管形成過程中內皮細胞會形成細胞條索，然后形成管腔，體外在特定條件下如基質膠、膠原等培養時也能形成管腔。藥物通過抑制管腔形成或使形成的管腔斷裂來達到抑制血管形成的作用。借助計算機軟件計算小管數及小管之間的連接數及小管的長度和面積，可定量分析藥物對管腔形成的影響。
二、實驗流程
細胞培養→細胞接種→加藥處理→結果分析
三、注意事項
1.流式檢測樣本 |
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樣本形式 | 處理方式 |
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血樣 | 當天采集的血液，置于抗凝管中，建議血量≥2mL，單個血樣對應分組較多時應適當加大采血量 | 4小時之內完成淋巴細胞分離 |
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組織 | 新鮮標本離體后置于PBS中，4℃保存運輸。離體時間不可超過24小時。 |
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細胞 | 武漢本地客戶可以將培養細胞的孔板交予銷售帶至實驗室，需要用封口膜密封，防止漏液。外地客戶需將有活力的細胞置于培養瓶中常溫快遞至公司檢測 |
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注意事項： |
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2.其他檢測 |
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檢測形式 | 處理方式 | 保存 | 運輸 |
流式細胞周期檢測 | 將細胞正常消化后，冷PBS懸浮細胞，之后緩慢加入4℃預冷無水乙醇固定，乙醇終濃度75% | -20℃ | 冰袋 |
流式細胞凋亡檢測 | 將細胞正常消化后，PBS洗一遍，PBS重懸 | 必須當天送樣 | 冰袋 |
Tunel細胞凋亡檢測 | 有活力的細胞，棄去培養液，PBS沖洗后，加入足量4%多聚甲醛，培養板附上保鮮膜，蓋上板蓋，膠布纏裹固定，避免固定液體流出 | 4℃ | 冰袋 |
原代分離實驗 | 無菌采取完整的組織塊，新鮮組織離體后置于無菌培養基中 | 離體時間不可超過4小時 | 冰袋 |
血小板的分離 | 需要選擇醫用真空采血管獲得抗凝血，全過程樣本均需在20±2℃的條件下進行。為獲得的實驗結果，最好在取血2h內進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過6h后分離效果更差甚至不能達到分離目的。 | 4℃ | 冰袋 |
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