實驗技巧
透射電鏡樣本準備方法及要求
以下所有樣本必須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結冰!
1、動物組織樣本
①1-3min內取樣,取樣組織米粒大小,盡量薄。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進行后固定。
②取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質;觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。
③取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。
④組織取下后立即投入電鏡固定液內室溫固定2h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
2、植物組織樣本
①取材要求同動物組織樣本。
②組織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液內,組織不能漂浮在固定液表面。
3、細胞樣本
貼壁細胞:培養好的細胞棄培養基不經漂洗迅速加電鏡固定液用細胞刮輕輕刮下細胞收集到離心管內(不要用胰酶消化細胞),離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀芝麻至綠豆大小,棄固定液后加新的電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
懸浮細胞:離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
4、細菌樣本
長于固體培養基的細菌:連帶著培養基一起挑下細菌放于電鏡固定液內室溫固定2h,再轉移至4°保存, 4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
懸浮細菌孢子等:離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
5、病毒
破碎組織細胞,粗離心去除細胞碎片取上清,超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒,4°保存運輸,盡快滴片做負染后及時電鏡觀察拍照。
6、外秘體囊泡等
客戶自己完成外秘體囊泡等的提取收集,用緩沖液(如PBS)懸浮,4°保存運輸,盡快制片做負染后及時電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解,樣品越新鮮越好,最好數小時內完成滴片負染,否則做出的效果很不理想甚至完全觀察不到)
7、納米材料等無機材料
直接準備粉劑或用緩沖液(如PBS)懸浮,常溫保存運輸即可。做負染后電鏡觀察拍照。