一、概念

透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡稱TEM),可以看到在光學顯微鏡下無法看清的小于0.2um的細微結構，這些結構稱為亞顯微結構或超微結構。要想看清這些結構，就必須選擇波長更短的光源，以提高顯微鏡的分辨率

二、原理

透射電子顯微鏡（transmission electron microscope，TEM）是利用陰極發射的電子，通過陽極中央的微孔形成的電子束穿透樣品獲得樣品的電子信號，經物鏡、中間鏡和投影鏡等多級電子放大至數百至數千萬倍，最后成像在熒光屏上便可即時觀察，或是投射到照相底片感光片上作為永久記錄。目前TEM的分辨力可達0.2 nm。

由于標本必須置于高真空中進行電鏡觀察，所以電鏡觀察的生物標本必須特殊制備，不能含水，離體的生物標本要迅速加以固定，以防產生結構改變。另外，電子的穿透力很弱，這就需要把樣品制成50 nm～100 nm厚的超薄切片（一個細胞切成100～200片）。為了使柔軟的生物組織能夠制成這樣薄的切片，并使切片耐受高真空和電子轟擊，所以在切片前要進行包埋。超薄切片技術是透射電鏡觀察成功的關鍵。

三、實驗流程

取材及戊二醛固定→漂洗→鋨酸固定→漂洗→丙酮梯度脫水→滲透→包埋→切片→雙染色→電鏡觀察及拍照

四、實驗結果

五、注意事項

（一）取材

1、快：實驗標本在動物麻醉或處死后1~2分鐘內取材、固定完畢；臨床活檢標本力爭組織離體后1分鐘內固定。固定液為預冷的2.5%緩沖戊二醛固定液。

2、小：電鏡標本的標準大小為1mm3。取材時，可先取稍大組織，經稍許時間的預固定后，再改小。

3、利：切割組織時，需用鋒利的手術刀片、雙面刀片劃取，避免揉割、牽拉和擠壓組織，防止機械損傷。禁止使用剪刀剪切。

4、凈：取材所用器皿，應事先清洗干凈并烘干。

5、冷：取材可在常溫下進行。如有條件最好在4℃低溫下操作，以減少組織自溶。所用器械、容器及固定液均應預冷。

6、所取標本做好標記：瓶簽上注明組別、編號等。

7、取材部位應準確：根據觀察內容和實驗目的，精準取材，如腫瘤取材時，應確保取到腫瘤實質，避免取腫瘤間質或出血、壞死部位。

（二）固定

預固定：2.5%緩沖戊二醛固定液，用量應為10~20倍于組織塊的體積，4℃固定至少30min以上。

取適量0.1mol/L PBS緩沖液清洗3次，每次10min。

后固定：1%鋨酸固定，腎臟固定4min，其他組織固定1h。

取適量0.1mol/L PBS緩沖液清洗3次，每次10min。

（三）培養細胞的取材和固定細胞樣本做透射電鏡處理辦法與保存條件

1．常規收集帖壁和懸浮細胞，置離心管中離心，800～1000r/min，10min。

2．用0.01mol/L PBS 5ml重懸細胞。

3．將細胞懸液吸入有瓊脂空槽的離心管中。

4．離心，2000r/min，15～20min，使細胞成團。

5．小心吸去上清，加入2.5％戊二醛固定液固定細胞團，以免細胞團散開。

6．取出離心管內的瓊脂，仔細切下尖槽內含有細胞團的瓊脂塊。

7．將含細胞的團瓊脂塊投入含戊二醛固定液的小瓶中，4℃（可長期）保存。

8．用0.1mol/L PBS緩沖液洗1次。

9．1％鋨酸后固定30～60min。